如何正确保存和传代CMCC(B)23010
神秘伯克霍尔德菌CMCC(B)23010 是一种常用于微生物实验室质量控制的标准菌株，广泛应用于食品、药品、化妆品等行业的阳性对照和培养基性能验证。该菌株为革兰氏阴性杆菌，生物安全等级为BSL-2，需在规范条件下进行保存与传代，以确保其活性和实验结果的可靠性。
神秘伯克霍尔德菌CMCC(B)23010 是一种常用于微生物实验室质量控制的标准菌株，广泛应用于食品、药品、化妆品等行业的阳性对照和培养基性能验证。该菌株为革兰氏阴性杆菌，生物安全等级为BSL-2，需在规范条件下进行保存与传代，以确保其活性和实验结果的可靠性。
一、正确保存方法
冻干菌种（常规形式）
- 短期保存：置于 2–8℃ 冷藏，可稳定保存 12个月。
- 长期保存：转移至 -80℃ 超低温环境，有效期可达 24个月以上。
- 采用真空冷冻干燥技术，菌体稳定性高，配套复苏液与复活说明书，便于操作。
定量菌株（含定量微球）
- 必须于 -20℃以下冷冻保存，有效期为12个月。
- 产品为白色近似球体，使用前需用1.1 mL复溶液溶解，涡旋震荡5–10秒使小球完全溶解，避免剧烈震荡导致菌体损伤。
活化后菌种（斜面或甘油冻存）
- 斜面培养物应保存于 2–8℃，建议 不超过1个月，定期重新活化。
- 工作菌种可制备为15–30%甘油冻存管，保存于 -80℃，作为种子库备份。
⚠️ 特别提醒：避免反复冻融，使用前将西林瓶平衡至室温再开启，防止冷凝水影响菌活性。
二、规范传代操作流程
无菌环境准备
- 所有操作应在 生物安全柜 中进行，穿戴实验服、手套与口罩，遵守BSL-2实验室防护要求。
冻干菌种复苏
- 将西林瓶平衡至室温（约30分钟）。
- 无菌操作加入 1.1 mL无菌复溶液 至瓶中，盖紧后涡旋震荡5–10秒，使冻干粉充分溶解。
- 吸取适量菌液接种至 TSA平板，于 30–35℃培养24–48小时，观察菌落生长情况。
传代培养
- 挑取单菌落，接种至新鲜TSA或麦康凯琼脂平板。
- 培养条件：30–35℃，24–48小时，确认菌落特征是否典型：
- TSA平板：无色或黄色圆形菌落
- 麦康凯琼脂：浅黄褐色菌落，周围培养基因产碱变橙黄色
- BCSA琼脂：淡红色菌落，周围培养基变红
控制传代次数
- 建议传代次数 ≤4代，防止菌株退化或突变。
- 每次传代后应记录菌落形态、生长速度及生化特性变化。
菌种验证
- 每次传代后建议进行以下验证：
- 革兰染色：确认为阴性杆菌
- 氧化酶试验：迟缓阳性（2–10分钟）
- 葡萄糖氧化型：加石蜡管不变黄，不加石蜡管变黄
- recA基因测序：比对确认为 Burkholderia aenigmatica strain CMCC(B) 23010（Accession: CP091646.1）
- 每次传代后建议进行以下验证：
三、关键注意事项
- 避免室温存放：室温下菌株易失活，不推荐任何形式的常温储存。
- 防止交叉污染：操作器具需严格灭菌，实验台面使用75%酒精消毒。
- 定期质量验证：包括菌落形态、生化反应和基因鉴定，确保菌株稳定性。
- 规范标识管理：瓶身应标注菌号、传代次数、保存温度与日期，防止混淆。
